SISTEMAS AQUOSOS BIFÁSICOS FORMADOS POR CONSTITUINTES NÃO CONVENCIONAIS PARA PURIFICAÇÃO DE ENZIMAS LIPOLÍTICAS

Abstract

As lipases têm atraído uma especial atenção por catalisar com extrema eficiência e especificidade diversas reações de interesse industrial, entretanto a comercialização e a produção em escala industrial destas enzimas dependem das técnicas empregadas na purificação. Sistemas aquosos bifásicos (SABs) é um método de purificação eficiente, importante para o desenvolvimento de processos de separação sustentáveis, “biocompatível”, permitindo enzimas com níveis elevados de purificação. Este trabalho apresenta três abordagens que incluem a formação de SABs à base de: solvente orgânico (tetrahidrofurano – THF) + sal; THF + líquidos iônicos (ou sais) à base de colinas; polietilenoglicol (PEG) + sal + líquido iônico (IL) como adjuvante (5 %, m/m). Todos estes sistemas foram aplicados para a purificação da lipase extracelular de Bacillus sp. ITP-001, produzida por fermentação submersa. Dois diferentes corantes (rodamina 3G e ácido cloranílico) e outras lipases (Candida antarctica B e Burkholderia cepacia) foram utilizadas como modelo para a purificação da lipase extracelular ou para a compreensão de alguns efeitos nos diagramas de fases. Após os estudos de otimização, os resultados demonstram que a lipase de Bacillus sp. ITP-001 foi purificada ≈ 104 vezes utilizando o SAB à base de THF + tampão fosfato, ao passo que o SAB formado por THF + bitartarato de colina e SAB à base PEG 1500 + tampão fosfato + LI [C6mim]Cl como adjuvante, a purificação foi de ≈ 130 e 245 (vezes), respectivamente. Os sistemas utilizando líquido como adjuvante foi selecionado como o mais eficaz para a purificação da lipase de Bacillus sp. ITP-001 devido as capacidades de interações adicionais. Além disso, os resultados sugerem que estes sistemas podem ser aplicados para a purificação de diferentes lipases, não descartando a aplicação dos sistemas à base de THF ou sais de colinas, pois estes apresentaram boa capacidade para purificação, biocompatibilidade para as lipases estudadas, e são formados por constituintes considerados de baixo custo e de baixa viscosidade.