PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DA LIPASE DE Bacillus sp. ITP-001
Abstract
O uso de enzimas em diferentes segmentos industriais é cada vez maior. A obtenção de
enzimas compreende um conjunto de operações que incluem o processo fermentativo, as
etapas de separação e concentração de produto, seguidos ou não da sua purificação e secagem.
Portanto o objetivo deste trabalho foi aperfeiçoar o processo de purificação em sistema
aquoso bifásico e caracterizar bioquimicamente as enzimas lipolíticas obtidas a partir do
Bacillus sp. ITP-001em fermentação submersa. A purificação da enzima envolveu as etapas
de precipitação com sulfato de amônio com 80% de saturação e sistema aquoso bifásico
constituído por polietilenoglicol e sal fosfato de potássio. Após as referidas etapas, a enzima
apresentou um fator de purificação de 251,03 vezes, na qual a enzima teve maior predileção
pela fase salina do sistema. A lipase purificada na reação de hidrólise apresentou atividade
ótima em pH 7,0 e 55°C e a maior estabilidade foi verificada à 37°C e pH 5,0. A atividade
enzimática foi estimulada pelos íons Ca2+, Mg2+, Co2+, Mn2+, Zn2+ e Fe3+, e reduzida pelo
Cu+. O solvente etanol afetou fortemente a atividade enzimática, ao passo que o isopropanol,
metanol, acetona e acetonitrila afetaram ligeiramente a atividade, enquanto que apenas a
piridina teve um efeito positivo. Os valores de Km e Vmax foram respectivamente 0,0675 mol
e 0,0110 mol/min pelo método de Wolf-Augustinisson-Hofstce na reação de hidrólise. Foi
verificado também o potencial de produção de ésteres, sendo observado que uma lipase com
maior afinidade por cadeias carbônicas curtas.